1. <nav id="do0hw"></nav>
      1. 搜索???Search
        聯系我們???Contact
        你的位置:首頁 > 新聞動態 > 技術文摘

        細菌脂肪酸的提取與分析

        2018/9/10 10:22:28??????點擊:

              試劑:  0.3%甲醛、6 mo1/1 HC1-CH3OH溶液、三氯甲烷方法:  GC- -MS 聯用分析測定,步驟如”下:
        (1)菌體的培養與收集

              I組實驗菌株用YPD液體培養基培養,在培養基中添加一定量的抗凍保護劑,接種后放入30°C、150 r/ min的搖床中培養24 h。細胞振蕩培養至生長對數中期,移取適量細胞懸浮液至-30°C冰箱冷凍7d,  取出30°C 下解凍5-10min,用0.3%甲醛滅活后,  4000r / min下離心5 min,  棄去上清液,用蒸餾水洗滌,離心收集細胞,-18C冷凍, 冷凍真空干燥制得千細胞后備用。

              空白樣用0.3%甲醛滅活后,  4000 r/ min下離心5 min,棄去上清液,用蒸餾水洗滌,離心收集細胞,-18C冷凍 24h,冷凍真空千燥制得千細胞后備用。

              II組實驗菌株用于面包冷凍面團的制備,添加抗凍保護劑,于-20C冷凍30d后取出解凍,取20g解凍后的面團,分散于180ml 無菌水中,震蕩30min,  靜置15min,離心并取上清液。用0.3%甲醛滅活后,  4000r / min下離心15 min,  棄去上清液,用蒸餾水洗滌,離心收集細胞,-18C冷凍,冷凍真空干燥制得干細胞后備用。空白樣則不添加抗凍保護劑,其余處理方法-樣。

        (2)  脂肪酸的甲基化與提取

              取50 mg凍千細胞加入6 mol/1 HC1-CH3OH溶液2 m1,置100°C的條件下鹽酸水解甲基化3 h,溶液呈現棕褐色(或黑褐色),取出,置室溫下冷卻。加入正己烷1.5m1振蕩。經4000 r / min離心10min, 收集上清液再加入正已烷1.5m1 .抽提一次,合并兩次.上清液,加入蒸餾水3ml,經4000r/ min離心10 min,收集上清液于離心管中。用流動N2吹千,加入10μ1三氯甲烷制備脂肪酸酯化液。

        (3)薄層層析

              用玻璃毛細管取脂肪酸酯化液點在硅膠G-TLC薄層板上,以正已烷+無水乙醚(1+1)為展層系統,待層析液至硅膠板上緣后立即取出薄層板,風干。在UV254燈下檢查制備的脂肪酸純度與相對濃度。將脂肪酸甲酯帶做好標記,輕輕刮下,用二乙醚抽提兩次,經N吹千后加入0. 5ml無水甲醇振蕩溶解,然后進行GC一MS分析。 
        (4)GC--MS操作條件

            程序升溫:初溫130°C,  保持1 min;  終溫280°C,維持min,升溫速度7.6°C / min。  檢測器溫度250°C;載氣(He)流速30ml / min; 分流比50: 1;流速(He)49. 9ml / min;進樣量1μl。  (2)中質譜條280°C,質量掃描范圍35-500。

        48.3K
        客服楊經理
        客服徐經理
        網頁在線咨詢
        澳门巴黎人